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默克色譜柱在實(shí)際應(yīng)用中有哪些常見的問題?

更新時(shí)間:2024-07-01      點(diǎn)擊次數(shù):757

在實(shí)際應(yīng)用中,默克色譜柱可能會(huì)遇到一些常見問題,這些問題可能涉及到色譜柱的連接、活化、使用、維護(hù)和存放。以下是一些常見的問題及其解決方法:

1. 色譜柱連接問題:色譜柱安裝時(shí),應(yīng)注意連接方向,避免接反。連接管接頭長度過長可能導(dǎo)致密封不良和泄漏,影響基線漂移或響應(yīng)降低。理想的接頭連接應(yīng)無死體積,防止管道滑動(dòng),并具有良好的長期穩(wěn)定性。

2. 反相柱活化平衡:新柱活化是一個(gè)平衡過程,可能需要用流動(dòng)相平衡,有時(shí)還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡,特別是對(duì)于分子量較高的多肽。平衡方式簡單,多進(jìn)幾次樣品直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定。

3. 反相柱沖洗并保存:用50:50甲醇或乙腈與水的混合溶液沖洗20-30倍柱體積,然后用純甲醇或乙腈沖洗20-30倍柱體積;存放前將柱端接頭上的塞子密封嚴(yán)密,以防止填料變干。

4. 反相柱清洗和再生:清洗或反沖反相色譜柱時(shí),用至少30倍柱體積的溶劑沖洗。如果壓力沒有恢復(fù)正常,可以考慮使用更強(qiáng)的條件進(jìn)行清潔,如75%乙腈/25%異丙醇、100%異丙醇、100%二氯甲烷、100%己烷。

5. 色譜柱使用中的常見問題:包括pH值、溫度、溶劑耐受性、壓力、樣品等。色譜柱的使用條件不應(yīng)超過制造商推薦的范圍,包括壓力、pH范圍、水相耐受性、柱溫等。當(dāng)測(cè)試條件接近色譜柱使用范圍的極限值時(shí),色譜柱的壽命會(huì)受到影響。

6. C18柱的pH和溫度調(diào)節(jié):通過調(diào)節(jié)pH和柱溫來優(yōu)化分離度是方法開發(fā)中非常重要的方法。中性或不可電離的化合物對(duì)pH值的變化不敏感。對(duì)于可離子化的化合物,可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值和控制化合物的電離狀態(tài)來改變化合物的反相保留。

7. 塔總超壓的原因:過壓通常是由包括色譜柱在內(nèi)的液體流路堵塞引起的。需要進(jìn)行分段排查,確定阻塞位置,然后根據(jù)阻塞位置排查阻塞的可能原因。

這些問題及其解決方法可以幫助用戶更好地理解和使用默克色譜柱,確保色譜分析的準(zhǔn)確性和效率。


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